Pcambia เวกเตอร์ ไบนารี ตัวเลือก

ฟรีเว็บโฮสติ้งไม่มีโฆษณาหรือแบนเนอร์คุณสามารถจินตนาการฟรีเว็บโฮสติ้งบริการที่มี uptime 99.9 ดีเกินไปที่จะเป็นจริงไม่มี 000webhost ได้ทำให้การปฏิวัติลืมตายตัวที่ฟรีโฮสติ้งไม่น่าเชื่อถือ นี่คือหลักฐาน: uptime stats จาก 20 เซิร์ฟเวอร์ เราชนะผู้ให้บริการโฮสติ้งที่ได้รับอนุญาตของคุณพื้นที่จัดเก็บข้อมูล 1500 MB พื้นที่เก็บข้อมูล 100 GB PHP, MySQL, FTP, cPanel .. บริการโฮสติ้งฟรีของเรามีคุณสมบัติมากกว่า 60 คุณลักษณะเช่นเดียวกับการชำระเงินโฮสติ้ง ไม่ จำกัด จำนวนการเข้าใช้งาน PHP, MySQL, FTP, cPanel, Website Builder และคุณสมบัติอื่น ๆ อีกมากมายกำลังรอคุณอยู่อย่างแน่นอนฟรีโฮสติ้งไม่ จำกัด จำนวนที่ไม่ จำกัด จำนวนการลงทะเบียนกับ hosting24 - เนื้อที่ดิสก์ไม่ จำกัด , การโอนข้อมูลไม่ จำกัด , โฮสต์ไม่ จำกัด โดเมนเพียง 3.99 1500 เนื้อที่ดิสก์ของ MB, การถ่ายโอนข้อมูลขนาด 100 GB ทุกบัญชีจะได้รับเนื้อที่ 1500MB และมีแบนด์วิดท์ขนาด 100GB ซึ่งเป็นไปได้โดยการเชื่อมต่อที่ไม่ได้ต่อรองที่เซิร์ฟเวอร์ของเราใช้ หากไซต์ของคุณต้องการมากกว่าชุดมาตรฐานของเราสามารถนำเสนอได้เรามีตัวเลือกการอัปเกรดมากมาย PHP with MySQL Database Support ซึ่งแตกต่างจากเว็บโฮสติ้งฟรีอื่น ๆ ที่เราสนับสนุน PHP และ MySQL โดยไม่มีข้อ จำกัด คุณสามารถเข้าถึงเวอร์ชันล่าสุดของ PHP และ MySQL คุณสมบัติ PHP ต่อไปนี้ได้รับการสนับสนุนอย่างเต็มที่: ฟังก์ชัน PHP mail () และ Sendmail Curl, GD2 library, XML, Zend htaccess สนับสนุน fopen () และ PHP sockets safemode ปิดการอัพโหลดไฟล์อยู่บน Zend Optimizer สนับสนุน Ioncube loader และคุณลักษณะอื่น ๆ อีกมากมายที่เปิดใช้งาน cPanel Control Panel cPanel เป็นแผงควบคุมที่ทันสมัยที่สุดในอุตสาหกรรม มีคุณลักษณะมากมายและใช้งานง่ายแม้กระทั่งสำหรับมือใหม่ ความช่วยเหลือแบบอินเทอร์แอคทีฟการสอนวิดีโอจะช่วยให้คุณเข้าใจว่าทำไม cPanel จึงดีที่สุดและคุณจะไม่ต้องการเปลี่ยนไปใช้สิ่งอื่นใด cPanel ใช้กันอย่างแพร่หลายโดยเจ้าภาพที่ได้รับการชำระเงิน แต่เราจะให้คุณเป็นอย่างดีฟรี Fantastico De Luxe 1 คลิกที่ Autoinstaller ในที่สุดเราเป็น บริษัท แรกที่ให้บริการฟรีบนเว็บโฮสติ้งที่ให้คุณสามารถเข้าถึง Fantastico Autoinstaller ได้ Fantastico เป็นระบบที่ออกแบบมาเพื่อทำให้การติดตั้งสคริปต์ยอดนิยมทำได้ง่าย ถ้าคุณต้องการปรับปรุงเว็บไซต์ของคุณด้วยฟอรัมการสนทนาหรือแกลเลอรีออนไลน์เพื่อแสดงทุกคนในวันหยุดพักผ่อนล่าสุดของคุณคุณสามารถทำได้ ด้วยการคลิกเมาส์ไม่กี่ครั้งเว็บไซต์ของคุณจะกลายเป็นทรัพยากรที่ยอดเยี่ยมสำหรับคุณธุรกิจหรือครอบครัวของคุณ Fantastico สามารถติดตั้งสคริปต์ยอดนิยมกว่า 40 แบบเช่น: Drupal, Geeklog, Joomla, Xoops, WordPress, b2evolution, Support Logic Helpdesk, phpBB2, SMF, OS Commerce, สมุดเยี่ยม Viper, Coppermine Photo Gallery, PhpWiki, PHPauction, WebCalendar และอื่น ๆ หากต้องการดูรายการการติดตั้งที่มีอยู่ทั้งหมดคลิกที่นี่ ซอฟต์แวร์สร้างเว็บไซต์โฮสติ้งของเราถูกเพิ่มประสิทธิภาพด้วย SiteReptile สร้างเว็บไซต์ SiteReptile เป็นวิธีที่ง่ายที่สุดในการใช้ตัวสร้างเว็บไซต์ในตลาด เพียง 3 ขั้นตอน (ป้อนรายละเอียดการเข้าสู่ระบบของคุณเลือกแม่แบบคุณภาพสูง 330 ชุดแล้วคลิกเผยแพร่) และเว็บไซต์ของคุณพร้อมสำหรับการแก้ไข เพียงแค่คลิกเดียว - และคุณสร้างหน้าเว็บย่อยหรือสร้างฟอร์มติดต่อ ฟรีเว็บโฮสติ้งพรีเมี่ยมเว็บโฮสติ้ง Website Builder เว็บไซต์แม่แบบเว็บโฮสติ้งความคิดเห็น Affiliate Program เว็บโฮสติ้งฟอรั่ม 2007-2015 (c) Copyright First Class Web Hosting. pCambia Vectors ข้อมูลเกี่ยวกับ vectors ล่าสุดของเราซึ่งมี GUSPlustrade อาจพบได้ใน BioForge แม้ว่า Cambia จะไม่เผยแพร่เวกเตอร์เหล่านี้แล้ว แต่คุณยังคงสามารถขอให้พวกเขาจากห้องทดลองอื่น ๆ ที่ใช้หรือเผยแพร่โดยใช้พวกเขาได้ (ข้อมูลเหล่านี้มีอยู่ภายใต้ข้อกำหนดของโอเพนซอร์สของสัญญาอนุญาต BiOS) ข้อมูลส่วนใหญ่ด้านล่างเกี่ยวข้องกับ pCAMBIA ที่เก่ากว่า vectors การเปลี่ยนแปลงของพืชเป็นเรื่องปกติในหลายร้อยห้องปฏิบัติการทั่วโลกโดยใช้วิธีการถ่ายโอน DNA ที่ใช้แบคทีเรียหรือโดยตรงเช่นการทิ้งระเบิด วิธีการเหล่านี้มีทั้งข้อ จำกัด ด้านเทคนิคและทรัพย์สินทางปัญญา (ดูโครงการ BioForge TransBacter ซึ่งมีการปรับปรุงทางเลือกในการเปลี่ยนแปลง Agrobacterium เพื่อให้มีอิสระในการดำเนินงานมากขึ้น) ข้อผิดพลาดทางเทคนิคที่ใหญ่ที่สุดแห่งหนึ่งของห้องปฏิบัติการก็คือพาหะนำโรคที่มีคุณสมบัติต่ำกว่าเกณฑ์ที่ทำให้โครงสร้างดีเอ็นเออึดอัดหรือยุ่งยาก: แหล่งที่มาของการจำลองแบบต่ำซึ่งส่งผลให้มีดีเอ็นเอที่ให้ผลผลิตต่ำทำให้ไม่สามารถสร้างพลาสมิดได้ในระหว่าง การแพร่กระจายขนาดใหญ่ที่ไม่มีข้อ จำกัด ในการเลือกใช้ข้อ จำกัด ในการจัดการข้อ จำกัด ทางเลือกของเครื่องหมายที่เลือกได้สำหรับแบคทีเรียและพืชไม่มีวิธีง่ายๆในการสร้างนักข่าว gene fusions โครงสร้างกระดูกสันหลังของ pCAMBIA vector มาจากพาหะ pPZP (สร้างขึ้นโดย Hajdukiewicz, Svab amp Maliga ดูเอกสารอ้างอิง ) แม้ว่าจะไม่สมบูรณ์แบบและมีข้อ จำกัด ด้านเทคนิคและข้อ จำกัด ด้าน IP (ดูโครงการ BioForge GUSPlus ซึ่งมีการปรับปรุงยีนของนักข่าวและวิธีการคัดเลือกเพื่อให้เสรีภาพดำเนินการได้อย่างสมบูรณ์มากขึ้น) พาหะของ pCAMBIA มีจำนวนสำเนาสูงใน E. coli เพื่อให้ได้ดีเอ็นเอสูง pVS1 replicon มีความเสถียรสูงใน Agrobacterium ขนาดเล็ก 7-12kb ขึ้นอยู่กับพื้นที่ จำกัด plasmid ที่ออกแบบมาสำหรับการปรับเปลี่ยน plasmid modular และ poly-linkers ขนาดเล็ก แต่พอเพียงสำหรับการแนะนำ DNA ของคุณในการเลือกแบคทีเรียด้วย chloramphenicol หรือ kanamycin กับ hygromycin B หรือ kanamycin (phosphinothricin การเลือกถูกยกเลิกตามคำร้องขอของเจ้าของ IP, ไบเออร์หลังจากการแจกจ่ายครั้งแรกในปีพ. ศ. 2540) วิธีง่ายๆในการสร้างการสังเคราะห์การแปลให้กับยีนของ gusA reporter ไม่กี่จุดเกี่ยวกับกลยุทธ์การโคลน pCAMBIA: โพรพิลีน pUC18 ถูกนำมาใช้ในพาหะ แต่ puc8 และ pUC9 polylinkers ก็ถูกนำมาใช้เพื่อลดความยุ่งยากในการเลือกใช้เอนไซม์การโคลนนิ่ง ในยุคของ PCR ไม่จำเป็นต้องมีไซต์โคลนนิ่งเป็นจำนวนมากอีกต่อไป polylinkers ขนาดเล็กยังขจัดความขัดแย้งที่อาจเกิดขึ้นจากไซต์ต่างๆเช่น Sph I (ซึ่งมี ATG) หรือ Xba I (ซึ่งมี TAG) ทำให้ไซต์อื่น ๆ ในเวกเตอร์มีประโยชน์มากขึ้น (เช่นไซต์ Sph I นอกขอบด้านขวาของ T-DNA หรือไซต์ Sac II ด้านนอกขอบด้านซ้ายของ T-DNA Border) ยีนการเลือกพืชในพาหะ pCAMBIA ถูกขับเคลื่อนด้วยตัวโปรโมเตอร์ CaMV35S แบบ double-enhancer และถูกยกเลิกด้วยสัญญาณ polyA CaMV35S โปรดทราบว่าโปรโมเตอร์ 35S นี้สามารถมีผลต่อการแสดงออกของยีนอื่น ๆ ในเทปเดียวกันได้ดังนั้นควรใช้การตีความยีนโดยใช้อนุพันธ์ของ pCAMBIA ในส่วนของโปรโมเตอร์นี้อยู่ในปัจจุบันควรได้รับการตีความด้วยความระมัดระวัง นอกจากนี้คุณยังรับผิดชอบในการตรวจสอบว่าโปรโมเตอร์ 35S หรือส่วนประกอบอื่น ๆ ที่คุณใช้อยู่ภายใต้สิทธิบัตรในประเทศของคุณหรือไม่ คุณสามารถขอความช่วยเหลือได้ที่เว็บไซต์ CAMBIAs Patent Lens ยีนเทอร์ไบน์มีแท็ก hexa-histidine ที่จุดปลาย C เพื่อให้สามารถทำให้บริสุทธิ์ได้ง่ายขึ้นเมื่อเรซินโครมาโตกราฟีแบบ chromatography ลำดับสำหรับแท็กนี้เกิดขึ้นระหว่างไซต์ Nhe I แรก (มีไซต์ Nhe I ครั้งที่สองใน repository pVS1 ที่เราไม่ได้ถูกกำจัด) และไซต์ Pml I ที่ไม่ซ้ำกัน ยีนที่น่าสนใจอาจถูกแทรกแทนที่ gene reporter การแทรกโดยไม่มี codon แบบหยุดและในเฟรมที่ (ครั้งแรก) ไซต์ Nhe I จะเพิ่ม hexa-histidine tag ลงในโปรตีนที่คุณสนใจ การแทรกโดยไม่มี codon แบบหยุดและในเฟรมที่ไซต์ Pml I จะใช้ codon แบบหยุดต่อท้าย การแทรกที่ไซต์ Bst EII จะไม่เพิ่มแท็กหรือรหัสหยุด (ดังนั้นคุณอาจต้องแน่ใจว่ามีการแทรกลำดับที่นี่มีรหัสการหยุดทำงาน) การตั้งชื่อของเวกเตอร์ pCAMBIA: ระบบเลขสี่หลักทำงานดังนี้: ตัวเลขแรก - ระบุการเลือกพืช: 0 สำหรับกรณีที่ไม่มี 1 สำหรับความต้านทานต่อไฮโดรเจนซินที่ 2 สำหรับ kanamycin และ 3 สำหรับ phosphinothricin (เวกเตอร์ที่มียีนต้านทานความสัมพันธ์ phosphinothricin จะไม่สามารถใช้งานได้อีกต่อไปจาก CAMBIA ที่ คำขอของไบเออร์ซึ่งเป็นเจ้าของสิทธิบัตร จำกัด การใช้งานในบางประเทศ) ตัวเลขที่สอง - บ่งชี้ถึงการเลือกแบคทีเรีย: 1 สำหรับ spectinomycinstreptomycin resistance 2 สำหรับ chloramphenicol 3 สำหรับ kanamycin 4 สำหรับ specstrep และ kanamycin ตัวเลขที่สาม - ระบุว่าใช้โพลีลินเคอร์: 0 สำหรับ polylinker pUC18 8 สำหรับ pUC8 polylinker 9 สำหรับ polylinker pUC9 ตัวเลขที่สี่ - ระบุยีนของนักข่าว: 0 สำหรับยีนรายงาน 1 สำหรับ E. coli gusA 2 สำหรับ mgfp 5 3 สำหรับ gusA: mgfp 5 fusion 4 สำหรับ mgfp5: gusA fusion 5 สำหรับ Staphylococcus sp. gusA (GUSPlus) Fifth digit - บันทึกคุณลักษณะพิเศษอื่น ๆ จนถึงขณะนี้มีการใช้เฉพาะกับ: pCAMBIA1305.1 และ plasmids ที่ได้จากมันซึ่ง. 1 หมายถึงการไม่มีตัวรับสัญญาณเปปไทด์จากโปรตีน GUSPlustrade และ pCAMBIA1305.2 โดยที่ .2 แสดงถึงการมีตัวรับสัญญาณ GRP peptide สำหรับ ในการหลั่งจากพืชของโปรตีน GUSPlustrade ตัวอักษรลาเวนเดอร์ - X แสดงว่ายีน reporter ไม่มี codon เริ่มต้นของตัวเองและเวกเตอร์เป็นตัวสร้าง fusions ให้กับ reporter Z ระบุว่ามี lacZa ทำงานอยู่สำหรับการตรวจคัดกรอง blue-white abc แสดงกรอบการอ่านสำหรับ fusions ด้วยฟิวส์และเวคเตอร์ Use โน๊ตสำคัญ . เนื่องจากข้อ จำกัด ด้านทรัพยากรไม่ได้สร้างชุดค่าผสมเวกเตอร์ที่เป็นไปได้ทั้งหมดที่ CAMBIA ในตอนแรกคุณอาจรู้สึกผิดหวังที่พบว่าเราไม่มีตัวอย่างเช่น pCAMBIA2205.2 เวกเตอร์ได้รับการออกแบบมา แต่อย่างใดเช่นว่ามันควรจะเป็นเรื่องที่ค่อนข้างง่ายสำหรับนักวิจัยที่ต้องการเวกเตอร์ดังกล่าวเพื่อสร้างมันขึ้นมาจากส่วนประกอบในพาหะอื่น ๆ หากคุณได้สร้างอนุพันธ์ของเวคเตอร์ pCAMBIA ซึ่งนักวิจัยรายอื่นเห็นว่าเป็นประโยชน์และคุณต้องการแบ่งปันกับนักวิจัยคนอื่น ๆ โปรดส่งอีเมลถึงเรา เวกเตอร์เป็นส่วนหนึ่งของชุดใหม่ของพาหะ pCAMBIA GT-BACK (ความสามารถในการถ่ายทอดยีน - ความสามารถในการได้รับเชื้อแบคทีเรียด้วยการเลือก kanamycin) ซึ่งครอบคลุมเวอร์ชัน pCAMBIA 1105.1 ที่แก้ไขแล้วและเป็นส่วนของ plasmid Ti (มาจาก pTiBo542) ที่มีเพียง virA, virB, virC, virD, virE, virG, virK amp virJ operons เวกเตอร์แบบใหม่นี้ช่วยให้ความสามารถในการถ่ายเทดีเอ็นเอสามารถเคลื่อนย้ายเข้าไปในและมีเสถียรภาพในช่วงกว้างของแบคทีเรียและจะมีให้เป็นชุดเครื่องมือโอเพนซอร์ส คุณลักษณะที่เพิ่มมูลค่าของเวกเตอร์ใหม่ในเทคโนโลยี Transbacter คือ: วัวมันสามารถกระจายเป็นจุดดีเอ็นเอเจือจางบนกระดาษ (เช่นในจดหมาย) ไม่จำเป็นต้องสอดคล้องกับการควบคุมการนำเข้าสิ่งมีชีวิตและประเด็นกักกันอื่น ๆ นี่คือวิธีการที่ห้องปฏิบัติการนับพันแห่งทั่วโลกได้รับชุดเวกเตอร์ pCAMBIA (และส่งเพิ่มเติม) วัว GT-BacK เวกเตอร์ขาด RK2 ที่ได้มาซึ่ง Transbacter ดำเนินการดังนั้นการขจัดหรือลดความสามารถของ plasmid ที่จะ conjugated และส่งผ่านไปยังโฮสต์อื่น ๆ โดยฟังก์ชัน RK conjugation มีต้นกำเนิดของการจำลองแบบในพื้นที่ห่างไกลจาก pVS1 ทำให้แบคทีเรียสามารถแพร่กระจายได้กว้างมากขึ้นเป็นพาหะนำยีนที่ถ่ายทอดทางพันธุกรรมทำให้สามารถเลือกสัญลักษณ์ที่ไม่เป็นอันตรายซึ่งไม่ได้กำหนดความเครียดทางกายภาพหรือทางพันธุกรรมของพืช ถ้าคุณต้องการที่จะพูดคุยหรือสอบถามวัสดุใด ๆ ของ CAMBIA โปรดเข้าสู่ระบบ pCAMBIA0380 pCAMBIA0390 เวกเตอร์เหล่านี้มีช่วงของไซต์ข้อ จำกัด ด้านทั้งสองด้านของ polylinker pUC8 (0380) หรือ pUC9 (0390) ทำให้เหมาะสำหรับการก่อสร้างขั้นสูงโดยมีผู้ใช้แทรกอยู่ ตัวยับยั้งการทำงานของตัวเอง, ยีนเลือก, ยีนของนักข่าว ฯลฯ สัญญาณทำงานเฉพาะระหว่างเส้นขอบของ T-DNA คือการเริ่มต้นและหยุด codons, แท็ก histidine และสัญญาณ NOS-poly (A) คุณสมบัติมาตรฐานของกระดูกสันหลังของ pCAMBIA มีดังนี้: การเลือกแบคทีเรีย kanamycin, จำนวนสำเนาสูงใน E. coli และการจำลองแบบที่มีเสถียรภาพใน A. tumefaciens pCAMBIA1200 pCAMBIA1300 pCAMBIA1380 pCAMBIA1390 pCAMBIA2200 pCAMBIA2300 นักวิจัยที่ต้องการเวอร์ชันล่าสุดควรดู pCAMBIA 1305.1, pCAMBIA1105.1 หรือ pCAMBIA 1305.2 ซึ่งสามารถขอได้จากโครงการ BioForge GUSPlus ข้อมูลเกี่ยวกับเวกเตอร์ pCAMBIA ที่เก่ากว่านี้เหมาะสำหรับการใช้งาน พาหะเหล่านี้มีลำดับ heterologous น้อยที่สุดสำหรับการแปลงและการเลือก transformants พวกเขาสามารถแทรกยีนที่ต้องการสำหรับการแปลงเป็นพืชได้ แต่ต้องมีลำดับ promoter และ terminator ทั้งหมดสำหรับการแสดงออกของยีนที่สร้างใหม่ของยีน พล็อตการเลือกน้อยที่สุดมียีนที่เลือกจากพืชสองตัว ได้แก่ hpt II เป็นสารต่อต้านความต้านทานต่อ hygromycin หรือ npt II ในการเข้ารหัส kanamycin ในทั้งสองกรณียีนการคัดเลือกจะถูกขับเคลื่อนด้วยโปรโมเตอร์ CaMV35S ที่เพิ่มขึ้นสองเท่า ยีนเหล่านี้ถูกทำให้เกิดการกลายพันธุ์ที่ไซต์กำกับเพื่อขจัดไซต์ที่มีข้อ จำกัด การแทรกแซงภายในลำดับการเขียนโค้ดโดยการเปลี่ยนแปลงโดยไม่ได้ตั้งใจ มีเครื่องหมายความต้านทานแบคทีเรีย 2 ตัว (kanamycin หรือ chloramphenicol) ซึ่งจะช่วยให้สามารถใช้สายพันธุ์ Agrobacterium หรือ E. coli ได้หลากหลาย ตัว polylinker pUC18 ภายในชิ้นส่วน acZa l ช่วยให้สามารถตรวจคัดลอกโคลนนิ่งของโคลนได้ในงานโคลน E. coli pCAMBIA1380 และ 1390 ใช้ pCAMBIA1300 แต่ส่วนของ polylinker-lacZa pUC18 ถูกลบและแทนที่ด้วย polylinker pUC8 (1380) และ pUC9 (1390) ที่เรียบง่ายซึ่งไม่ได้มีจุดเริ่มต้นหรือหยุด codons ที่อาจเกิดขึ้นได้ รูปแบบโมดูลาร์เต็มรูปแบบมีให้สำหรับการทำ PCR cloning และการแสดงออกของยีนที่สะดวก สำหรับนักวิจัยที่ทำการวิเคราะห์โปรโมเตอร์ใช้เวกเตอร์น้อยที่สุดที่มี GUSPlus (pCAMBIA 0305.2 ซึ่งสามารถสั่งซื้อผ่านโครงการ BioForge GUSPlus) ได้มากกว่าเวกเตอร์ pCAMBIA อื่น ๆ กลยุทธ์การแปลงสภาพร่วมกันเป็นสิ่งที่พึงประสงค์ในการแยกทางพันธุกรรมของพืชที่แปลงสภาพเป็นตัวโปรโมเตอร์ของยีนการเลือกพืช (โดยปกติคือ 35S) และตัวก่อการก่อการร้าย (มักอ่อนแอหรือเฉพาะเจาะจงมากขึ้น) ในการขับยีน gus หรือ reporter อื่น ๆ วิธีที่เราได้รับการทำเช่นนี้มานานหลายปีแล้วคือมีการแปลงสองเวกเตอร์แยกออกเป็นสายพันธุ์เดียวกับ Agrobacterium (หรือมากกว่าโดยเฉพาะสายพันธุ์จากโครงการ BioForge TransBacter เพื่อความเป็นอิสระในการดำเนินงาน) แต่การเปลี่ยนแปลงร่วมกันอย่างเห็นได้ชัดก็สามารถทำได้ด้วย พร้อมกันกับสองแยกแต่ละสายพันธุ์ที่มีหนึ่งในเวกเตอร์ ถ้าใช้ตัวเดียวให้เลือกโคโลนีเดียวการวิเคราะห์ดีเอ็นเอของพลาสมิดเซลล์ที่เกิดขึ้นบนสื่อชนิดพิเศษ (ถ้าจำเป็นสำหรับพืชของคุณ) และทั้งสองสายพันธุ์ผสมกันทันทีก่อนที่จะนำไปประยุกต์ใช้กับเนื้อเยื่อพืชที่จะเปลี่ยน ในมือของเราวิธีนี้จะช่วยให้ 10-30 ของสายพันธุ์พืชแปลงที่มีทั้ง T-DNAs pCAMBIA1201 pCAMBIA1301 pCAMBIA2201 pCAMBIA2301 นักวิจัยที่ต้องการเวอร์ชันล่าสุดควรดู pCAMBIA 1305.1, pCAMBIA1105.1 หรือ pCAMBIA 1305.2 ซึ่งสามารถขอได้จากโครงการ BioForge GUSPlus ข้อมูลเกี่ยวกับเวกเตอร์ pCAMBIA ที่เก่ากว่านี้เหมาะสำหรับการใช้งาน พาหะเหล่านี้ประกอบด้วย gus ที่ทำงานได้อย่างครบถ้วนผู้สร้างรายงานสำหรับการวิเคราะห์ยีนหรือการแสดงออกของยีนในพืชที่งอกใหม่โดยวิธี GUS ตัวสร้างนี้ใช้ E. coli gusA (N358Q mdash เพื่อหลีกเลี่ยงการเชื่อมโยง N-linked glycosylation) กับ intron (จากยีน castor bean catalase) ภายในลำดับการเขียนโค้ดเพื่อให้แน่ใจว่าการแสดงออกของกิจกรรม glucuronidase จะมาจากเซลล์ที่มียูคาริโอท เซลล์ A. tumefaciens ยีน reporter gusA ถูกโคลนในรูปแบบโมดูลใหม่ plasmids เหล่านี้เหมาะสำหรับการแทรกตัวของยีนอื่น ๆ ที่น่าสนใจที่มีโปรโมเตอร์และ terminator ของตัวเอง นักวิจัยสามารถลดยีน gusA และแทรกยีนของตัวเองที่น่าสนใจในสถานที่ของตนหรือใช้เวกเตอร์เหล่านี้เพื่อสร้าง fusions ของ gusA ด้วยยีนของพวกเขาที่น่าสนใจ (ถ้าคุณได้สร้างอนุพันธ์เวกเตอร์ pCAMBIA ที่นักวิจัยอื่น ๆ จะพบว่ามีประโยชน์และต้องการแบ่งปัน โปรดแจ้งให้เราทราบ) พาหะเหล่านี้ประกอบด้วย pUC18 polylinker - lacZa และแบคทีเรียและยีนการเลือกพืชเช่นเดียวกับเวกเตอร์การเลือกน้อยที่สุดของพวกเขา pCAMBIA1302 pCAMBIA1303 pCAMBIA1304 สำหรับผู้ที่ต้องการสิ่งที่ดีที่สุดในโลกทั้งสองแบบของยีนผู้สื่อข่าวเราได้สร้างพาหะเหล่านี้เช่นเดียวกับยูทิลิตีไปยัง GUS Intron Selection Vectors (GIS) แต่รวมถึง GFP การเป็นโปรตีนที่ไม่มีตัวเร่งปฏิกิริยาจะทำให้ขีด จำกัด ภายในของความไวในการตรวจจับด้วยโปรตีนเรืองแสงและอุปกรณ์ที่มีราคาแพงเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการตรวจสอบเชิงปริมาณและการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ GFP ยังคงได้รับความนิยมในฐานะนักข่าวและเราให้บริการโคลนแบบเต็มรูปแบบใหม่สำหรับผู้ที่ต้องการใช้ พาหะเหล่านี้มีพื้นฐานมาจาก pCAMBIA1301 (ความต้านทานต่อแบคทีเรีย kanamycin, การเลือก hygromycin ของพืช, pUC18 polylinker ใน lacZa) แต่มีโปรตีน fluorescent สีเขียว Aequoria victoria (Siemering et al. 1996) ซึ่งมีอยู่ในตัวเดียว - pCAMBIA1302 หรือในฟิวชั่นแปล กับ gusA (N358Q) ในการจัดเตรียมทั้งสองอย่าง: pCAMBIA1303 มีการหลอมรวม gusA-mgfp5 - His6 และ pCAMBIA1304 มีการหลอม fusion ของ mgfp5-gus A-His6 นี่เป็นรูปแบบของ gusA (N358Q) ซึ่งไม่มีความหมายดังนั้นจึงมีความเป็นไปได้ที่การแสดงออกของ transformants หลักเป็นผลมาจากการแสดงออกของโปรตีนนักข่าวโดยเซลล์ Agrobacterium tumefaciens หรือแบคทีเรียอื่น ๆ ที่อยู่ในวัฒนธรรมของพืช การวิเคราะห์จำนวน transformants ของข้าวและ Arabidopsis ที่ CAMBIA พบว่าการเรืองแสงที่ผลิตโดยโปรตีน MGFP5 ค่อนข้างเป็นลม อันเป็นผลมาจากการนี้นักวิจัยของเราได้สร้างโครงสร้างที่คล้ายกันโดยใช้ยีน egfp จาก Clontech ผลลัพธ์ที่ได้กับโปรตีนเหล่านี้ดีกว่ามากและแม้ว่าเราจะไม่สามารถแจกจ่ายพาหะที่มียีนนี้ได้ แต่เราขอแนะนำให้นักวิจัยซื้อ pEGFP จาก Clontech และใช้เพื่อสร้าง plasmids ของตัวเองคล้ายกับ pCAMBIA1302, pCAMBIA1303 หรือ pCAMBIA1304 pCAMBIA1381 และ 1391 และรูปแบบของ Xa, b, c ORF ออกแบบมาเพื่อใช้ประโยชน์ gus A ในฐานะนักข่าวที่แท้จริงของการแสดงออกของยีนด้วยการสร้างฟิวชันเวคเตอร์เหล่านี้ได้มาจาก pCAMBIA1380 และ 1390 และมี promoterless, ไม่ใช่ intron gus A (N358Q) (ไม่มี codon เริ่มต้น) ในสามเฟรมการอ่านและมี pylen pUC8 หรือ pUC9 ที่มุ่งเน้น polylinkers นี้จะช่วยให้การก่อสร้างที่เรียบง่ายของฟิวชั่นโปรตีนคาร์บอกซี่ปลายทางเพื่อ gusA การคัดเลือกพืชด้วย hygromycin และการเลือกแบคทีเรียด้วย kanamycin pCAMBIA1381 และ 1391 เวกเตอร์อาจใช้สำหรับการสร้าง transcriptional หรือแปล fusions ไป gus A. พวกเขาจะคล้ายคลึงกับ Xa, b, c ชุดแม้ว่าพวกเขาจะรักษา codon เริ่มต้นของเว็บไซต์ Nco I ในโครงสร้าง modular ใหม่รอบ gus A (N358Q) และมีอยู่ในกรอบการอ่านเดียวเท่านั้น pCAMBIA1281Z pCAMBIA1291Z pCAMBIA1381Z pCAMBIA1391Z ออกแบบมาสำหรับการทดสอบโปรโมเตอร์ใน planta พาหะเหล่านี้มีรูปแบบโปรโมเตอร์ gus A (N358Q) ที่มีอินทรีย์ catalase intron ทันทีที่มี lucZa ที่ตัดทอนทั้ง pUC8 หรือ pUC9 polylinker plasmids ทั้งหมดในชุดนี้มี hygromycin เป็นยีนการเลือกพืชและการเลือกแบคทีเรียสามารถใช้ได้กับ chloramphenicol (1281Z, 1291Z) หรือ kanamycin (1381Z, 1391Z) lacZa ที่ตัดทอนมีหน้าที่ในการตรวจคัดกรองโคลนในชุดสายพันธุ์ E. coli ที่เหมาะสม ประสบการณ์กับพาหะเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าโปรโมเตอร์ 35S ที่แรงมาก (ในความเป็นจริงเป็นรุ่นเสริมสองครั้ง) ซึ่งขับเคลื่อนยีน hptII ใน T-DNA ของเหล่า pCAMBIAs เหล่านี้และ pCAMBIAs อื่น ๆ ส่วนใหญ่ทำให้เกิดการรบกวนที่สำคัญในรูปแบบการแสดงออกที่สังเกตได้ ตีความผลลัพธ์ของคุณด้วยความระมัดระวังตัวแปลงควบคุมเชิงลบที่สร้างโดยใช้หนึ่งในพาหะเหล่านี้โดยไม่มีโปรโมเตอร์เพิ่มต้นน้ำของยีน gusA แสดงการแสดงออกของ GUS ระดับต่ำถึงปานกลางในเนื้อเยื่อต่างๆ การทดลองกับดักที่เพิ่มขึ้นที่ CAMBIA โดยใช้เวอร์ชันที่ได้รับการจัดเรียงใหม่ของพาหะเหล่านี้แสดงให้เห็นถึงการแสดงออกของการแทรกแซงที่สอดคล้องกันซึ่งเราอ้างว่าเป็นตัวโปรโมเตอร์ 35S ในบริเวณใกล้เคียง การแสดงออกของสิ่งประดิษฐ์นี้อาจเพิ่มมากขึ้นในการทดลองซึ่งนักวิจัยพยายามที่จะวิเคราะห์รูปแบบที่ตัดแต่งของผู้สนับสนุนของพวกเขาที่น่าสนใจซึ่งขาดลำดับการฉนวนตามธรรมชาติของโปรโมเตอร์แบบเต็มความยาว เพื่อป้องกันการแทรกแซง 35S จากการวิเคราะห์โปรโมเตอร์เราขอแนะนำให้ใช้กลยุทธ์การแปลงร่วมตามที่อธิบายไว้ข้างต้นในส่วนของ Minutes Vectors Vectors ในกลยุทธ์ดังกล่าวโปรโมเตอร์ที่น่าสนใจสามารถโคลนเป็นหนึ่งใน Promoter Cloner Vectors ของเรา แต่ก่อนอื่นควรปรับเปลี่ยนโดยการประมวลผลด้วย Sma I amp Xmn I เป็นครั้งแรกการเจลทำความสะอาดส่วนกระดูกสันหลังส่วนใหญ่ (8.9kb) และตัวเอง - ligation เวกเตอร์ดังกล่าวอาจเรียกได้ว่า pCAMBIA0381Z แต่เราไม่เคยสร้างมันขึ้นมาเพื่อเป็นส่วนหนึ่งของชุดเวกเตอร์ pCAMBIA Genotypes ของสายพันธุ์ Agrobacterium tumefaciens ที่มีประโยชน์ Warning การใช้ Agrobacterium มีข้อ จำกัด ในเขตอำนาจศาลเช่นประเทศสหรัฐอเมริกาและอาจไม่ฉลาดที่จะใช้ในการวิจัยใด ๆ ที่อาจส่งผลให้มีผลิตภัณฑ์สำหรับขายหรือนำเข้ามาในสหรัฐอเมริกา คุณอาจต้องการใช้ระบบ Transbacter แทนเพื่อเสรีภาพในการทำงาน สำหรับข้อมูลดูโครงการ BioForge TransBacter LBA4404 (Ach5 pTiAch5) SmSp (R) ใน plasmid ความรุนแรง (จาก Tn904) ทั้งหมด T-DNA ของ pTiAch5 ถูกกำจัดใน pAL4404 (Hoekema et al. 1983) EHA101, genotype C58 pTiBo542 T-region :: aph, Km (R) A281 อนุพันธ์ที่มี pEHA101, T-DNA แทนที่ด้วย nptII การกำจัดขอบเขตของ T-DNA ที่ไม่ได้รับการยืนยัน super-virulent (Hood และคณะ 1986) EHA105 เป็นอนุพันธ์ของ Km (S) ของ EHA101 (Hood และคณะ. 1993) AGL1, genotype คือ AGL0 (C58 pTiBo542) recA :: bla, T-region deleted Mop () Cb (R) AGL0 คือ EHA101 ที่มี T-region deleted ซึ่งจะลบยีน aph (Lazo et al. 1991) A281, สายพันธุ์ที่สร้างใหม่, อนุพันธ์ของ A136 (Cured C58) ที่มี pTiBo542, super-virulent (Hood และคณะ. 1986) Ach5 agrocinopine, octopine type B6S3, A6 ชนิด octopine Bo542 leucinopine, succinamopine, agropine type, vir อ่อนกว่า A281 C58, T37 nopaline ชนิด A281 succinamopine, leucinopine, agrocinopine ยาปฏิชีวนะ Chloramphenicol, 100 ไมโครกรัมสำหรับสายพันธุ์ AGL1, 10 ไมโครกรัมสำหรับ LBA4404, 25 ไมโครกรัมสำหรับ EHA105 และสำหรับ E. coli Kanamycin, 50 microgmL สำหรับทั้ง Agrobacterium และ E. coli สำหรับการคัดเลือกข้าวที่ทำการแปรรูปเราใช้ hygromycin ที่ 50 ไมโครกรัมและ 25 ไมโครกรัมสำหรับยาสูบ เฉิน L, Zhang S, Beachy RN, Fauquet CM (1998) โปรโตคอลสำหรับการผลิตข้าวพันธุ์จีเอ็มโอที่อุดมสมบูรณ์อย่างสม่ำเสมอ รายงานการวิจัยพืช 18: 25-31 Christou P (1991) การผลิตข้าวพันธุ์ (Oryza sativa L. ) จากพืช indica และ japonica ที่สำคัญทางการเกษตรโดยการเร่งอนุภาคไฟฟ้าออกจากดีเอ็นเอภายนอกไปยังตัวอ่อน zygotic ที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะ เทคโนโลยีชีวภาพ 9: 957-962 Christou P (1997) การแปรรูปข้าว: bombardment โรงงาน Mol Biol 35: 197-203 Deblaere R, Reynaerts, Hofte H, Hernalsteens JP, Leemans J และ Van Montagu M (1987) Vectors สำหรับการโคลนนิ่งในเซลล์พืช Meth Enzymol 153: 277-292 Hajdukiewicz, P, Svab, Z, Maliga, P. (1994) ตระกูลพาหะนำโรค Agrobacterium pPZP อเนกประสงค์ขนาดเล็กสำหรับการเปลี่ยนแปลงของพืช Plant Mol Biol 25: 989-994 Hiei Y, Ohta S, Komari T, Kumashiro T (1994) การแปลงข้าวที่มีประสิทธิภาพ (Oryza sativa L. ) โดยอาศัย Agrobacterium และการวิเคราะห์ลำดับของขอบเขตของ T-DNA โรงงาน J 6: 271-282 Hoekema A, Hirsch PR, Hooykaas PJJ, Schilperoort RA (1983) กลยุทธ์แบบ binary vector ขึ้นอยู่กับการแยก vir - และ T-region ของ plasmid Agrobacterium tumefaciens Ti Nature 303: 179-180 Hood EE, Helmer GL, Fraley RT, Chilton MD (1986) hypervirulence ของ Agrobacterium tumefaciens A281 ถูกเข้ารหัสในพื้นที่ของ pTiBo542 นอก T-DNA J Bac 168: 1291-1301 Hood EE, Gelvin SB, Melchers S, Hoekema A (1993) พลาสมิดผู้ช่วย Agrobacterium ใหม่สำหรับการถ่ายทอดยีนไปยังพืช (EHA105) Trans Res 2: 208-218 Jefferson RA, Kavanagh TA, Bevan MW (1987) Fusions GUS: Beta-glucuronidase เป็นตัวยีนฟิวชั่นที่ละเอียดอ่อนและมีความหลากหลายในพืชสูงกว่า EMBO J 6: 3901-3907 Klapwijk PM, Van Breukelen J, Korevaar K, Ooms G, Schilperoort RA (1980) T ransposition ของ Tn904 การเข้ารหัสความต้านทาน streptomycin ลงใน plasmid Ti octopine Ti ของ Agrobacterium tumefaciens J Bac 141: 129-136 Lazo GR, Stein PA, Ludwig RA (1991) ห้องสมุด Genomic ของ Ara bidopsis ที่มีการเปลี่ยนแปลงดีเอ็นเอใน Agrobacterium BioTechnology 9: 963-967 Ohta S, Mita S, Hattori T, Nakamura K (1990) การสร้างและการแสดงออกในยาสูบของยีนที่เป็นตัวยับยั้ง beta-glucuronidase (GUS) ที่มี intron ภายในลำดับการเขียนโค้ด Plant Cell Physiol 31: 805-814 Ooms G, Hooykaas PJJ, Van Veen RJM, Van Beelen P, Regensburg-Tunk JG, Schilperoort RA (1982) Octopine Ti-plasmid mutates ของ Agrobacterium tumefaciens โดยเน้นด้านขวาของ T - ภูมิภาค. Plasmid 7: 15-29 Peralta EG, Hellmiss R, Ream W (1986) Overdrive, ตัวกระตุ้นการแพร่กระจาย T-DNA ใน plasmid เนื้องอกของเนื้องอก A. tumefaciens EMBO J 5: 1137-1142 Porath, J. (1992) ตรรกะที่ใช้ตรึงรูปโลหะไอออนเรืองแสง Protein Expre Purif 3: 263-281 Siemering KR, Golbik R, Sever R, Haseloff J (1996) การกลายพันธุ์ที่ยับยั้งความไวต่อความร้อนของโปรตีนเรืองแสงสีเขียว Curr Biol 6: 1653-1663 Tanaka A, Mita S, Ohta S, Kyozuka J, Shimamoto K, Nakamura K (1990) การเพิ่มการแสดงออกของยีนต่างประเทศโดย intron dicot ในข้าว แต่ไม่อยู่ในยาสูบมีความสัมพันธ์กับระดับที่เพิ่มขึ้นของ mRNA และ intlicing ที่มีประสิทธิภาพของ intron Nucl Acids Res 18: 6767-6770 ทรัพยากรอื่น ๆ หากคุณต้องการปรึกษาหรือสอบถามเนื้อหาของ CAMBIA โปรดส่งอีเมลมาที่ materialscambia. org อ่านคำถามที่พบบ่อยเกี่ยวกับการขอเอกสารจาก CAMBIA อ่านคำถามที่พบบ่อยเกี่ยวกับเวกเตอร์ pCAMBIA ข้อมูล GUSPlus ในโครงการ BioForge GUSPlus ภาควิชาโรคพืชและสรีรวิทยาพืช, Louisiana State University และ LSU AgCenter, Baton Rouge, USA สำเนาลิขสิทธิ์ 2013 Norimoto Murai นี่เป็นบทความเกี่ยวกับการเข้าถึงแบบเปิดที่แจกจ่ายภายใต้ใบอนุญาตครีเอทีฟคอมมอนส์ซึ่งอนุญาตให้ใช้การแจกจ่ายและการทำสำเนาได้ไม่ จำกัด โดยใช้สื่อใด ๆ ที่ได้รับการอ้างอิงอย่างถูกต้อง ได้รับ 7 มีนาคม 2013 แก้ไขวันที่ 4 เมษายน 2013 ยอมรับวันที่ 13 เมษายน 2013 คำสำคัญ: Agrobacterium tumefaciens เวกเตอร์ไบนารี pRK2 pRi pSA pVS1 T-DNA Ti Plasmid การทบทวนครั้งนี้เป็นการพัฒนาพาหะนำวัคซีนของพลาสมา Ti Plasmid ใน Agrobacterium tumefaciens ในช่วง 30 ปีที่ผ่านมา กลยุทธ์เวกเตอร์แบบไบนารีได้รับการออกแบบในปีพ. ศ. 2526 เพื่อแยกพื้นที่ T-DNA ในพลาสมิดตัวเล็ก ๆ จากยีนที่มีความรุนแรงใน plasmid T-DNA-less Ti ไม่เหมาะสม พาหะของพืชขนาดเล็กที่มีพื้นที่ T-DNA ได้รับการเรียกว่าตอนนี้เพียงแค่เรียกว่า binary Ti vectors เวกเตอร์ไบนารี Ti ประกอบไปด้วย replicon ระยะโฮสต์สำหรับการแพร่กระจายใน A. tumeraciens ซึ่งเป็นยีนต้านทานความต้านทานยาปฏิชีวนะสำหรับการคัดเลือกแบคทีเรียและภูมิภาค T-DNA ที่จะถูกโอนไปยังจีโนมของพืชผ่านกลไกความรุนแรงของแบคทีเรีย บริเวณ T-DNA คั่นด้วยลำดับด้านซ้ายและด้านขวาจะมียีนต้านทานความต้านทานยาปฏิชีวนะสำหรับการคัดเลือกพันธุ์พืชยีนนักข่าวและยีนที่สนใจ ColéI replicon ถูกเพิ่มเข้ากับแกนหลัก plasmid เพื่อเพิ่มการแพร่กระจายของ Escherichia coli แนวโน้มทั่วไปในการพัฒนาเวกเตอร์ไบนารีได้เพิ่มความเสถียร plasmid ในช่วงระยะเวลาร่วมของ A. tumefaciens กับเนื้อเยื่อพืชที่เป็นเป้าหมาย แนวโน้มที่สองคือการทำความเข้าใจกลไกโมเลกุลของการจำลองแบบระยะโฮสต์และใช้มันเพื่อลดขนาดของ plasmid เพื่อความง่ายในการโคลนนิ่งและเพื่อให้ plasmid สูงขึ้นใน E. coli replicon host-range แบบกว้าง ๆ ของ VS1 แสดงให้เห็นว่าเป็นตัวเลือกของ replicon เหนือ pRK2, pRi และ pSA เนื่องจากเสถียรภาพที่เหนือกว่าและขนาดเล็กที่กำหนดไว้อย่างชัดเจน replicon พหุคูณของพืชที่พัฒนาขึ้นใหม่ pLSU มีขนาดเล็กของกระดูกสันหลัง plasmid (4566 bp) ประกอบด้วย VS1 replicon (2654 bp), ColE1 replicon (715 bp), kanamycin แบคทีเรีย (999 bp) หรือยีน tetracycline resistance และ T-DNA ภูมิภาค (152 bp) Agrobacterium tumefaciens เป็นแบคทีเรียแกรมลบและเชื้อโรคในพืชที่เป็นสาเหตุของโรคถุงน้ำดีในหลอดอาหารและพืชชนิดอื่น ๆ 1. การปฏิสัมพันธ์ของเชื้อ Agrobacterium กับพืชเป็นระบบรูปแบบแรกที่กลไกการทำลายเชื้อโรคของพืชได้อธิบายไว้ในรายละเอียด 2.3 ประมาณ 20 kbp ส่วน DNA (T-DNA) ใน plasmid เนื้องอกที่สร้าง (ประมาณ 200 กิโลบิตต่อม plasmid) จะถูกถ่ายโอนจากแบคทีเรียไปยังจีโนมแผนภาพโฮสต์โดยใช้เครื่องจักรระดับโมเลกุลใกล้เคียงกับการถ่ายโอนระหว่างสมรสของแบคทีเรีย 4-6 ลักษณะฟีโนไทป์ของโรคเป็นปรากฏการณ์ของการแสดงออกของยีน T-DNA ของแบคทีเรียในเซลล์พืชที่มีการผลิตฮอร์โมนการเจริญเติบโตของพืชสองชนิดคือ cytokinin และ auxin ระบบการถ่ายทอดดีเอ็นเอตามธรรมชาตินี้ได้ถูกนำมาใช้เพื่อแนะนำยีนที่น่าสนใจทางการเกษตรในพืชซึ่งส่งผลให้เกิดการผลิตพืชดัดแปลงพันธุกรรมโดย บริษัท เทคโนโลยีชีวภาพด้านพืช วิธีการเริ่มต้นของการถ่ายทอดยีนคือการแนะนำยีนเป้าหมายเข้าไปในพื้นที่ T-DNA ของ plasmid Ti หลังจากการรวมตัวกันครั้งเดียว (cointegration) หรือ double-homologous ระหว่าง vector กลาง (pRK290) และ plasmid Ti 7,8 ได้รับการออกแบบมาเพื่อแยกพื้นที่ T-DNA ในพลาสมิดขนาดเล็กจากยีนที่มีความรุนแรงใน plasmid T-DNA-less Ti plarid 9 โดยไม่ต้องพึ่งพาพืชขนาดเล็กที่มีพื้นที่ T-DNA ได้เพียงแค่เรียกว่า binary Ti พาหะ 10,11 เกือบต้นกำเนิดของการจำลองแบบของ pRK2 ที่จุดเริ่มต้นของการประยุกต์ใช้ ตารางที่ 1 ภาพรวมของพาหะของ Ti แบบ binary ของพืชที่ระบุไว้ตามช่วงกว้างของ replicons โฮสต์ที่ใช้สำหรับการขยายพันธุ์ใน Agrobacterium tumefaciens และ Escherichia coli หมายเหตุ: 1: Coléli replicon ที่ได้จาก pBR322 หรือ pUC18 ถูกเพิ่มเพื่อส่งเสริมการแพร่กระจายของพาหะ Ti แบบไบนารีใน E. coli 2: Mobilization (Mob) ของพาหะนำโรคด้วยความช่วยเหลือจาก pRK2013 จาก E. coli ถึง A. tumefacience (ใช่) หรือ เป็นไปไม่ได้ (ไม่มี) โดยการผสมพันธุ์ทางพันธุกรรม 3: การเลือกแบคทีเรียด้วยยาปฏิชีวนะ: chloramphenicol (chl), kanamycin (kan), gentamycin (gen), spectinomycin (spc), streptomycin (str) หรือ tetracycline (tet) ยีน Neomycin Phospho Transtransferase (NPTI) เป็นตัวกำหนดความต้านทานต่อการิมาซินในแบคทีเรียที่ 4: จุดกำเนิดของลำดับเบสของ T-DNA จาก nipaline (nop) หรือ octopine (oct) ชนิด plasmids Ti, nopaline type plasmid Ti consensus border sequence (cons) 5: ยีนเครื่องหมายยีนที่คัดเลือกได้จากพืชลำดับโปรโมเตอร์หรือเทอร์มิเนเตอร์ที่ได้มาจากยีน nopaline synthase (nop), ยีน synthopase octopine (oct), ยีน manopine synthase (mas), ไวรัส Mosaic 35 กะโหลก (35S) หรือ Tumor Morphology Large (tml) T ยีน DNA ยีน BAR ความต้านทานต่อเชื้อ Bialaphos (BAR) ทำให้เกิดความทนทานต่อสารเคมีกำจัดวัชพืช glufosinate ยีน Gentamycin Acetyl Transferase (aacC1) สามารถยับยั้งการต่อต้าน gentamycin ในพืชได้ Hygromycin PhosphoTransferase (HPT) เป็นพื้นที่ที่มีการเขียนโค้ดในเรื่องความต้านทานต่อ hygromycin ในพืช ขอบเขตการเข้ารหัสของ Neomycin PhosphoTransferase (NPTII) เป็นตัวกำหนดความต้านทานต่อการิโคซินในพืช ระบุตำแหน่งยีนเครื่องหมายยีนที่ใกล้เคียงกับลำดับด้านชายแดนด้านซ้าย (LB) หรือเส้นขอบด้านขวา (RB) แยกออกมาจาก Klebsiella aerogenes 12. คุณลักษณะที่เป็นประโยชน์ของ P-1 replicon คือแบคทีเรียแกรมลบที่กว้างขวาง pRK2 ถูกจำลองและคงไว้ใน Escherichia coli, A. tumefaciens, Sinorhizobium meliloti, Pseudomonas aeruginosa และสายพันธุ์อื่น ๆ อนุพันธ์ขนาดเล็กของ pRK2 ถูกสร้างขึ้นเช่น 20.0 kbp pRK290, 11.0 kbp pTJS133, 10.3 kbp pRK252 และ 7.0 kbp pTJS75 13. การจำลองแบบของอนุพันธ์ pRK2 ต้องใช้พื้นที่ 700 bp oriV และ trfA และการบำรุงรักษา plasmids เหล่านี้จำเป็นต้องใช้พื้นที่เพิ่มเติมตามชนิด . สำหรับ Agrobacterium การเก็บรักษาพลาสมิดอย่างต่อเนื่องในสภาพที่ไม่ได้รับการคัดเลือกหลังจาก 35 ชั่วอายุลดลงเรื่อย ๆ จาก pRK2 (100) ถึง pTJS133 (96), pRK290 (89), pTJS75 (57) และ pRK252 (12) อนุพันธ์ pRK2 ที่เล็กที่สุด pTJS75 มีความต้านทาน oriV, trfA, oriT และ tetracycline อนุพันธ์มีเสถียรภาพที่สุด pTJS133 ใน Agrobacterium ถูกสร้างขึ้นโดยการเพิ่มพื้นที่ 3.1 กิโลไบต์ที่ประกอบด้วย korA และ korB เป็น pTJS75 plasmid pRK2013 ที่แยกจากกันมียีนการถ่ายโอน pRK2 ยีนการเคลื่อนที่ของตัวเองและ ColE1 replicon และถูกใช้โดยการจับคู่แบบไตร - พ่อแม่ในการถ่ายโอนพลาสมิด pRK2 จาก E. coli ไปเป็น A. tumefaciens ดังนั้นข้อ จำกัด ที่สำคัญของพลาสมิดที่ได้จาก pRK2 ที่จะใช้สำหรับพาหะแบบ binary คือ loci หลายอันที่มีขนาดใหญ่สำหรับการจำลองแบบและการบำรุงรักษา plasmids (11.0 kbp pTJS133) ข้อ จำกัด อีกข้อหนึ่งก็คือพลาสมิดที่ได้รับ pRK2 ขนาดเล็ก (10.3 kbp pRK252, 7.0 kbp pTJS75 และ 5.0 kbp mini-pRK2 replicon vector) ได้รับการรักษาอย่างมีเสถียรภาพน้อยลงใน Agrobacterium ในสภาวะที่ไม่ได้รับการคัดเลือก 14,15 2.1 pRK252-based binary Vectors พร็อพเพอร์ตี้ pRK2 ขนาดเล็ก 10.3 kbp pRK252 เป็นกระดูกสันหลังของพาหะแบบ binary แรก pBin19 (11.8 kbp) พร้อมกับการเพิ่ม Streptocococus fecalis NPTIII ยีนสำหรับความต้านทานต่อแบคทีเรีย kanamycin, nopaline pTiT37 T-DNA border, marker mark plant: NPTII: nos, - พื้นที่ที่เสริมของ - galactosidase (lacZ locus) สำหรับการเลือกและ polylinker site จาก M13mp19 16. pBI121 (14.7 kbp) และโครงสร้าง pBI อื่น ๆ และ pBIB pBIB ใช้ pBin19 ร่วมกับการเพิ่มยีน reporter ใหม่ของ GUS 35S: GUS: nos 17,18 pAGS127 (15.0 kbp) มีแกนหลัก pRK252 ที่มีพื้นที่ T-DNA ประกอบด้วยขอบด้านขวาของ octopine pTiA6 และขอบด้านซ้าย pTiA5 ของ octopine เครื่องหมายเลือกพันธุ์พืช: NPTII: ocs, locus z locus และ polylinker และ cos site สำหรับขนาดใหญ่ การแทรกส่วนของดีเอ็นเอ 19 2.2. pRK290-based binary vectors pRK290 เป็นพลาสมิดที่ได้รับ pRK2 ตัวแรกที่พัฒนาขึ้นสำหรับเวคเตอร์เวกเตอร์ระหว่าง E. coli และ S. meliloti เพื่อศึกษาตำแหน่งทางพันธุกรรมของการตรึงไนโตรเจนและตรึงไนโตรเจนของแบคทีเรียตรึงไนโตรเจน 12. pRK290 ถูกใช้เป็น เวคเตอร์ระดับกลางเพื่อถ่ายโอนยีนพืชสำหรับโปรตีนที่เก็บโปรตีนเมล็ดเฟินโทลีนไปยัง TDNA ของ pTi15955 แล้วนำยีนดังกล่าวมาแสดงออกในจีโนมของดอกทานตะวันและยาสูบ 8,20 เวกเตอร์ binary vector pOCA18 (24.3 kbp) มีแกนหลัก pRK290 และพื้นที่ T-DNA ของขอบด้านขวาและด้านซ้ายของ octopine pTi เครื่องหมายเลือกพันธุ์พืช: NPTII: ocs และ cos เพื่อแทรกไลบรารีดีเอ็นเอของ Arabidopsis thaliana 21. ในทำนองเดียวกัน , pJJ1881 (25.7 kbp) มีกระดูกสันหลังของ pRK290 ที่มีขอบด้านขวาและด้านซ้าย pTiA6 ของ octopine pTiAch5 ซึ่งเป็นเครื่องหมายเลือกของพืช: NPTII: ยีน ocs, polylinker, 35S: GUS หรือ SPT: nos (SPT, Streptomycin PhosphoTransferase) หรือ transposons ของข้าวโพด Ac หรือ Ds 22 อนุพันธ์เวคเตอร์ pJJ1881 ที่ใช้ pRK290 แสดงให้เห็นว่าสามารถรักษาชิ้นส่วนดีเอ็นเอได้ดีกว่า 300 kbp ใน E. coli 23,24 2.3 pTJS75-Based Binary Vectors The plasmid pTJS75 was the smallest derivative (7.0 kbp) of pRK2 and used to generate binary vectors pGA471 (15.6 kb) 25,26 and pTRA409 (11.5 kbp) 27. The vector pGA471 has nopaline pTiT37 right and left borders, a plant selection marker gene nos:NPTII:nos, cos site and ColE1 replicon in T-DNA. The vector pTRA409 has the T-DNA with octopine pTi15955 right (with overdrive) and left borders, a plant selection marker gene tml:NPTII:tml and used to test promoter deletion mutants of the bean seed storage protein phaseolin gene. 2.4 mini-pRK2 Replicon-Based Binary Vectors The binary vector pPCV001 (9.2 kbp) has a conditional mini-RK2 replicon (oriV and oriT) and can be maintained in Agrobacterium and E. coli only when co-existed in trans with the trf and tra loci in a helper plasmid pRK2013 or in the E. coli chromosome 14. The T-DNA region of pPCV001 has nopaline pTiC58 right border and octopine pTiB6S3 left border, a plant selection marker gene nos:NPTII:ocs, and pBR322 sequence for plasmid rescue experiments 28,29. The binary vector pCB301 (5.0 kbp) was constructed by PCR cloning of a mini-pRK replicon (oriV and trfA) and bacterial NPTIII kanamycin resistance gene based on DNA sequence of pBin19 15. The T-DNA region consists of nopaline pTiT37 right and left borders, nos:BAR:nos plant selection marker gene (Bar, herbicide glufosinate) and pBlueScriptII polylinker for cloning. 3. Agrobacterium rhizogenes pRi Origin of Replication Agrobacterium rhizogenes is a soil-living plant pathogen causing hairy root disease. A large 200 kbp plasmid pRi has the T-DNA and virulence region and is responsible for causing the disease phenotype. The origin of replication of pRi plasmid locates within the 8.1 kb BanHI-11 fragment and can stably coexist with the pTi origin of replication in A. tumefaciens. The binary vector pC22 (17.5 kb) has the origin of replication of pRiHR1 and ColE1, bacterial resistance gene for ampicilincarbenicillin or streptomycinspectinomycin 30. The T-DNA region of pC22 consists of the right and left borders from octopine pTiB6S3, a plant selection marker gene nos: NPTII:nos, multi-cloning site (BamHI, XbaI) and the cos site for in vitro packaging of Arabidopsis thaliana genomic library. A second binary vector pCGN1547 (14.4 kb) also uses the origin of replication of pRiRH1 and ColE1 and a bacterial resistance gene for gentamycin 31. The T-DNA region of the vector has the right and left borders of octopine pTiA6, a plant selection marker mas:NPTII: mas, the lacZ locus and polylinker site from pUC18 for clonig. The stability of binary vectors in Agrobacterium was compared between plasmids with the origin of replication from pRi and pRK2, pCGN1547 and pBin19, respectively. pCGN1547 was much more stable than pBin19 and after 27 generations in non-selective conditions 54 of Agrobacterium lost the pBin19 while only 1 lost pCGN1547. Thus, the binary vectors containing the pRi origin of replication has the major advantage in stable maintenance, and a limitation in a low copy number of one or few in cells of Agrobacterium. 4. Broad Host-Range Origin of Replication from pSa of IncR Incompatability Group Wide-host-range origin of replication from pSa derived from a cryptic mini-plasmid P15A in E. coli. The replication locus of pSa ori and rep region is one of the smallest known naturally occurring replicons (2.3 kbp). The replication regions were split into two separate plasmids as two-component binary vector systems to reduce the size of T-DNA-containing plasmids 32. pGreen0029 (4.6 kbp) contains a bacterial kanamycin resistance gene, pSa origin of replication, and the TDNA with nopalinepTiT37 right (with overdrive) and left borders, and a plant selection marker nos:NPTII:nos. The suplementary plasmid pSoup (9.3 kbp) has a bacterial tetracycline resistance gene and pSa rep region. pSoup must co-exist in Agrobacterium for replication of pGreen. This two-component binary vector system was used to construct LucTrap vectors to generate transcriptional and translational fusion of the firefly luciferase reporter to randomly targetted genes 33. The stability of binary vectors in Agrobacterium was compared between plasmids with the origin of replication from pSa and pRK2, pGreen000 and pBin19, respectively. pGreen000 was less stable than pBin19 and after one-day in non-selective conditions 50 of Agrobacterium lost the pGreen000 plasmid. Thus, the stable maintenance of pSa-repiconcontaining binary vectors in Agrobacterium is the major limitation for its use when required for a long co-cultivation period of over two days. A new version of the two-component binary vector system, pCLEAN-G and pCLEAN-S corresponds to pGreen and pSoup, respectively 34. A new feature is that both plasmids have the T-DNA region delimited by nopaline pTi consensus right and left borders. The T-DNA of pCLEAN-G115 (6.0 kbp) has a plant selection marker gene 35S:HPT:nos, lacZ selection and polylinker. Supplementary pCLEAN-S166 (11.1 kbp) has a different selection marker nos:HPT:nos in T-DNA (HPT, Hygromycin Phospho Transferase). 5. Broad Host-Range Origin of Replication from pVS1 of IncP Incompatability Group pVS1 is a non-conjugative 29 kbp plasmid of IncP incompatibility group isolated from Psuedomonas aeruginosa. The plasmid was found to replicate in a wide-range of gram-negative bacteria including other Pseudomonas species (P. syringae, P. putida) as well as in A. tumefaciens and S. leguminosarun, but not in E. coli 35. A pVS1 derivative pME290 contains a 3.7 kbp region for replication and stability gene 36. Another pVS1 derivative pGV910 contains an 8 kbp fragment for the stability, replication and mobilization gene 37. The stability of pGV910 in A. tumefaciens GV3101 was compared with that of pRK2 replicon-containing pRK290 37. pGV910 was much more stable than pRK290 and after 15 generations in non-selective conditions only less than 0.5 lost pGV910 while 26 of Agrobacterium lost the pRK290. Plasmid pVS1 was found compatible with IncP-1 and IncP-4 replicons. Coexistence of pGV910 and pRK290 appeared to increase the stability of pRK290 and after 16 generations in nonselective conditions only 12 of Agrobacterium lost pRK290. The origin of replication of pVS1 was defined to a 3.1 kbp fragment for staA, ORF3, repA and oriV by sequence analysis, mutagenesis and maintenance assay in P. fluorescens 38. The coding region of StaA (209 codons) contains two ATP-binding sites and motifs typical of a partitioning protein and is essential for segregational stability. The ORF3 (71 codons) has no apparent similarity with other known proteins but deletion and mutational studies showed the ORF3 is important for segregational stability. The RepA protein with 357 codons shares a strong similarity with other RepA proteins. Mutation from Ala 246 to Val 246 increased the plasmid copy number from 5.9 to 13.8 copies per chromosome, mutation from Asp 260 to Asn 260 reduce the copy number. The oriV locus has the typical sequence organization of origin of replication, a DnaA box, four direct repeats of 21 bp each, an AT-rich region, and a second DnaA box. The backbone of binary Ti vector pPZP plasmid is the 3.8 kb fragment of pVS1 origin of replication and the 1.1 kb ColE1 replicon and bom site from pBR322 39. pPZP111 (11.8 kb) has the T-DNA region consisting of nopaline pTiT37 right and left borders, a plant kanamycin or gentamycin resistance gene 35S:NPTII or aacC1: 35S, respectively, lacZ selection and polylinker from pUC18. pPZP111 has a bacterial chloramphenicol resistance gene from pBR325, and pPZP211 (11.9 kb) has a bacterial streptomycinspectinomycin resistance aadA gene, encoding aminoglycoside-3-adenyltransferase. Presently, a series of pCAMBIA plasmids (9.0 kbp) are among the most widely utilized binary Ti vectors (Genbank accession numbers AF234290-AF234316). The plasmids have the same backbone of pPZP plasmids and their sizes are either 6.2 or 6.4 kb with a bacterial kanamycin or chloramphenicol resistance genes, respectively. The T-DNA region is delimited by the nopaline pTiT37 right (with overdrive) and left border sequences. Two types of plant selection marker are available as either the kanamycin or hygromycin resistance gene, 35S: NPTII or HPT:35S, respectively. Two - glucuronisase reporters are provided, GUS from E. coli (gusA Eco ) or GUSPlus from Staphylococcus sp. (gusA Ssp ). A second reporter green fluorescent protein is also available either as by itself (gfp) or fusion genes with GUS (gusA Eco :gfp or gfp:gusA Eco ). The lacZ selection with multi-cloning sites for insertion was derived from either pUC18, 8 or 9. Modular binary Ti vectors pMODUL and pSAT were developed based on pZP200 (6.7 kbp) as a backbone of the vectors 40,41. The pMODUL vectors took advantage of use of low frequency-occurring enzymes, 13 hexanucleotide and 6 ocatanucleotide restriction sites, and 5 homing endonuclease sites to construct six different expression units in a single construct. Modular pSAT vectors also used 6 octanucleotide restriction endonucleases and Gateway recombination cloning sites for modular assembly of Nand C-terminal fusions to five different autofluorescent tags enhanced green (EGFP), yellow (EYFP) and cyan fluorescent proteins ECFP), red autofluorescent protein (DsRed2), and reduced chloride-ionand pH-sensitivity yellow fluorescent protein (CitrineYFP). Most recently, a series of smaller high-yielding binary Ti vectors pLSU were constructed to increase the cloning efficiency and plasmid yield in E. coli and A. tumefaciens 42-44. The size of the binary vector backbone pLSU1 was reduced to 4566 bp with ColE1 replicon (715 bp) for E. coli and VS1 replicon (2654 bp) for A. tumefaciens, a bacterial kanamycin resistance gene (999 bp), and the T-DNA region (152 bp) ( Figure 1 ). The binary Ti vectors with the truncated VS1 replicon were stably maintained with more than 98 efficiency in A. tumefaciens without antibiotic selection for four days of successive transfers. The transcriptional direction of VS1 replicon can be the same as that of ColE1 replicon (co-directional transcription), or opposite (head-on transcription) as in the case of widely used vectors (pPZP or pCambia). The new pLSU vectors with co-directional transcription yielded in E. coli up to four-fold higher transformation frequency than those with the head-on transcription. In A. tumefaciens the effect of co-directional transcription is still positive in up to 1.8-fold higher transformation frequency than that of head-on transcription. Transformation frequencies of new vectors are over six-fold higher than those of pCambia vector in A. tumefaciens. DNA yields of new vectors were three to five-fold greater than pCambia in E. coli. Figure 2 illustrates the composition of T-DNA in pLSU1 to 5. pLSU1 is a basic backbone vector with the twelve common restriction sites in TDNA. pLSU2 and 3 have the kanamycin resistance NPTII gene as a plant-selectable marker. pLSU4 and 5 contain the hygromycin resistance HPH gene as a plant - Figure 1. Schematic presentation of backbone structure of binary Ti vector pLSU1 (4566 bp). T-DNA is at the top of figure delimited by the right (RB) and left border (LB) with 12 common restriction endonuclease sites, EcoRV (EV), SphI (Sp), HindIII (HIII), NcoI (Nc), XhoI (Xh), KpnI (K), EcoRI (EI), BamHI (BH), PstI (P), ScaI (Sc, XbaI (Xb), and SacI (Sa). The backbone plasmid include the Neomycin PhosphoTransferase I (NPTI), ColE1 origin of replication (ColE1), Stability region A (StaA), Replication region A (RepA), and VS1 origin of replication (VS1). Figure 2. Schematic presentation of the T-DNA region of binary Ti vectors pLSU1 to 5. pLSU1 is a basic backbone vector with the twelve common restriction sites in T-DNA. pLSU2 and 3 have the Neomycin PhosphoTransferase II gene (NPTII) adjacent to the left border as a plant selection marker for kanamycin resistance. pLSU4 and 5 contain the Hygromycin B Phosphotransferasae gene (HPH) adjacent to the left border as a plant selection marker for hygromycin resistance. pLSU3 and 5 also include the - glucuronidase reporter gene (GUS) in addition to the plant selection marker in the T-DNA. selection marker. pLSU3 and 5 also have the GUS reporter gene in addition to the plant-selectable marker. To be compatible with the Gateway Technology (Invitrogene), pLSU vectors were modified to include a bacterial tetracycline-resistance gene 42. The size of the tetracycline resistance gene TetC from pBR322 was reduced to 1468 bp containing 1191 bp of the coding region, 93 bp of 5 upstream, and 184 bp 3-downstream region. The final size of basic binary vector backbone pLSU11 is 5034 bp. pLSU12 and13 have the kanamycin resistance NPTII gene as a plant selection marker. pLSU14 and 15 contain the hygromycin resistance HPH gene as a plant-selectable marker. pLSU13 and 15 also have the - glucuronidase (GUS) reporter gene in addition to the plant selection marker. Constructed also was a mobilizable version of tetracycline-based binary Ti vector pLSU16 in which the mob function of ColE1 replicon was maintained for mobilization of the binary vector from E. coli to A. tumefaciens by tri-parental mating. The final size of binary Ti vector backbone pLSU16 is 5580 bp. The author wishes to acknowledge the financial support partly from the Department of Plant Pathology and Crop Physiology, the College of Agriculture, Louisiana State University, and from the Louisiana Agriculture Experiment Station, LSU AgCenter. E. F. Smith and C. O. Towsend, A Plant Tumor of Bacterial Origin, Science, Vol. 25, No. 643, 1907, pp. 671- 673. doi:10.1126science.25.643.671 I. Zaenen, N. Van Larebeke, H. Teuchy, M. Van Montagu and J. Schell, Supercoiled Circular DNA in Crown-Gall Inducing Agrobacterium Strains, Journal Molecular Biology, Vol. 86, No. 1, 1974, pp. 117-127. doi:10.1016S0022-2836(74)80011-2 M. D. Chilton, M. H. Drummond, D. J. Merlo, D. Sciaky, A. L. Montoya, M. P. Gordon and E. W. Nester, Stable Incorporation of Plasmid DNA into Higher Plant Cells: The Molecular Basis of Crown Gall Tumorigenesis, Cell, Vol. 11, No. 2, 1977, pp. 263-271. doi:10.10160092-8674(77)90043-5 J. R. Zupan and P. Zambryski, Transfer of T-DNA from Agrobacterium to the Plant Cell, Plant Physiology, Vol, 107, No. 4, 1995, pp. 1041-1047. doi:10.1104pp.107.4.1041 J. Sheng and V. Citovsky, Agrobacterium-Plant Cell DNA Transport: Have Virulence Proteins, Will Travel, Plant Cell, Vol. 8, No. 10, 1996, pp. 1699-1710. S. B. Gelvin, Agrobacterium-Mediated Plant Transformation: The Biology behind the Gene-Jockeying Tool, Microbiology Molecular Biology Reviews, Vol. 67, No. 1, 2003, pp. 16-37. P. Zambryski, H. Joos, C. Genetello, J. Leemans, M. Van Montagu and J. Schell, Ti Plasmid Vector for the Introduction of DNA into Plant Cells without Alteration of Their Normal Regeneration Capacity, EMBO Journal, Vol. 2, No. 12, 1983, pp. 2143-2150. N. Murai, D. W. Sutton, M. G. Murray, J. L. Slightom, D. J. Merlo, N. A. Reichert, C. Sengupta-Gopalan, C. A. Stock, R. F. Baker, J. D. Kemp and T. C. Hall, Phaseolin Gene from Bean Is Expressed after Transfer to Sunflower via Tumor-Inducing Plasmid Vectors, Science, Vol. 222, No. 4623, 1983, pp. 476-482. A. Hoekema, P. R. Hirsch, P. J. J. Hooykas and R. A. Schilperoort, A Binary Plant Vector Strategy Based on Separation of Virand T-Region of the Agrobacterium tumefaciens Ti Plasmid, Nature, Vol. 303, 1983, pp. 179-180. doi:10.1038303179a0 R. Hellens, P. Mullineaux and H. Klee, A Guide to Agrobacterium Binary Ti Vectors, Trends in Plant Science, Vol. 5, No. 10, 2000, pp. 446-448. T. Komori, T. Imayama, N. Kato, Y. Ishida, Y. Ueki and T. Komari, Current Status of Binary Vectors and Superbinary Vectors, Plant Physiology, Vol. 145, No. 4, 2007, pp. 1155-1160. G. Ditta, S. Stanfield, D. Corbin and D. R. Helinski, Broad Host Range DNA Cloning System for GramNegative Bacteria: Construction of a Gene Bank of Rhizobium meliloti, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol. 77, No. 12, 1980, pp. 7347-7351. doi:10.1073pnas.77.12.7347 T. J. Schmidhauser and D. R. Helinski, Regions of Broad-Host-Range Plasmids RK2 Involved in Replication and Stable Maintenance in Nine Species of Gram-Negative Bacteria, Journal of Bacteriology, Vol. 164, No. 1, 1985, pp. 446-455. C. Koncz and J. Schell, The Promoter of TL-DNA Gene 5 Controls the Tissue-Specific Expression of Chimeric Genes Carried by a Novel Type of Agrobacterium Binary Vector, Molecular General Genetics, Vol. 204, No. 3, 1986, pp. 383-396. doi:10.1007BF00331014 C. Xiang, P. Han, I. Lutziger, K. Wang and D. J. Oliver, A Mini Binary Vector Series for Plant Transformation, Plant Molecular Biology, Vol. 40, No. 4, 1999, pp. 711- 717. doi:10.1023A:1006201910593 M. Bevan, Binary Agrobacterium Vectors for Plant Transformation, Nucleic Acids Research, Vol. 12, No. 22, 1984, pp. 8711-8721. doi:10.1093nar12.22.8711 R. A. Jefferson, Assaying Chimeric Genes in Plants: The GUS Gene Fusion System, Plant Molecular Biology Reporter, Vol. 5, No. 4, 1987, pp. 387-405. doi:10.1007BF02667740 D. Becker, Binary Vectors Which Allow the Exchange of Plant Selectable Markers and Reporter Genes, Nucleic Acid Research, Vol. 18, No. 1, 1990, p. 203. doi:10.1093nar18.1.203 P. Van den Elzen, K. Y. Lee, J. Townsend and J. Bedbrook, Simple Binary Vectors for DNA Transfer to Plant Cells, Plant Molecular Biology, Vol. 5, No. 3, 1985, pp. 149-154. doi:10.1007BF00015678 C. Sengupta-Gopalan, N. A. Reichert, R. F. Baker, T. C. Hall and J. D. Kemp, Developmentally Regulated Expression of the - Phaseolin Gene in Tobacco Seed, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol. 82, No. 10, 1985, pp. 3320-3324. doi:10.1073pnas.82.10.3320 N. E. Olszewski, F. B. Martin and F. M. Ausubel, Specialized Binary Vector for Plant Transformation Expression of the Arabidopsis thaliana AHAS Gene in Nicotiana tabacum, Nucleic Acids Research, Vol. 16, No. 22, 1988, pp. 10765-10782. doi:10.1093nar16.22.10765 J. D. G. Jones, L. Shlumukov, F. Carland, J. English, S. R. Scofield, G. J. Bishop and K. Harrison, Effective Vectors for Transformation, Expression of Heterologous Genes, and Assaying Transposon Excision in Transgenic Plants, Transgenic Research, Vol. 1, No. 6, 1992, pp. 285-297. doi:10.1007BF02525170 A. F. Bent, B. N. Kunkel, D. Dahlbeck, K. L. Brown, R. Schmidt, J. Giraudat, J. Leung and B. J. Staskawicz, RPS2 of Arabidopsis thaliana: A Leucine-Rich Repeat Class of Plant Disease Resistance Genes, Science, Vol. 265, No. 5180, 1994, pp. 1856-1860. doi:10.1126science.8091210 Q. Tao and H.-B. Zhang, Cloning and Stable Maintenance of DNA Fragments over 300 kb in Escherichia coli with Conventional Plasmid-Base Vectors, Nucleic Acid Research, Vol. 26, No. 21, 1998, pp. 4901-4909. doi:10.1093nar26.21.4901 G. An, B. D. Watson, S. Stachel, M. P. Gordon and E. W. Nester, New Cloning Vehicles for Transformation of Higher Plants, EMBO Journal, Vol. 4, No. 2, 1985, pp. 277-284. G. An, High Efficiency Transformation of Cultured Tobacco Cells, Plant Physiology, Vol. 79, No. 2, 1985, pp. 568-570. doi:10.1104pp.79.2.568 M. D. Burow, P. Sen, C. A. Chlan and N. Murai, Developmental Control of the - Phaseolin Gene Requires Positive, Negative, and Temporal Seed-Specific Transcriptional Regulatory Elements and Negative Element for Stem and Root Expression, Plant Journal, Vol. 2, No. 4, 1992, pp. 537-548. doi:10.1111j.1365-313X.1992.00537.x C. Koncz, N. Martini, R. Mayerhofer, Z. Koncz-Kalma, H. Korber, G. Redei and J. Schell, High-Frequency TDNA-Mediated Gene Tagging in Plants, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol. 86, No. 21, 1989, pp. 8467-8471. doi:10.1073pnas.86.21.8467 B. Reiss, C. Koncz, I. Moore and J. Schell, A Family of Binary Gene Vectors with Low Inter-Transformant Variation, Plant Physiol. (Life Sci. Adv.), Vol. 13, 1994, pp. 143-149. C. Simoens, T. Alliotte, R. Mendel, S. Muller, J. Schiemann, M. van Lijsebettens, J. Schell, M. van Montagu and D. Inze, A Binary Vector for Transferring Genomic Libraries to Plants, Nucleic Acids Research, Vol. 14, No. 20, 1986, pp. 8073-8090. doi:10.1093nar14.20.8073 K. E. McBride and K. D. Summerfelt, Improved Binary Vectors for Agrobacterium-Mediated Plant Transformation, Plant Molecular Biology, Vol. 14, No. 2, 1990, pp. 269-276. doi:10.1007BF00018567 R. P. Hellens, E. Z. Edwards, N. R. Leyland, S. Bean and P. M. Mullineaux, pGreen: A Versatile and Flexible Binary Ti Vectors for Agrobacterium-Mediated Plant Transformation, Plant Molecular Biology, Vol. 42, No. 6, 2000, pp. 819-831. doi:10.1023A:1006496308160 L. I. A. Calderon-Villalobos, C. Kuhnle, H. Li, M. Rosso, B. Weisshaar and C. Schwechheimer, LucTrap Vectors Are Tools to General Luciferase Fusions for the Quantification to Transcript and Protein Abundance in Vivo, Plant Physiology, Vol. 141, No. 1, 2006, pp. 3-14. doi:10.1104pp.106.078097 V. Thole, B. Worland, J. W. Snape and P. Vain, The pCLEAN Dual Binary Vector System for Agrobacterium-Mediated Plant Transformation, Plant Physiology, Vol. 145, No. 4, 2007, pp. 1211-1219. doi:10.1104pp.107.108563 Y. Itoh, J. M. Watson, D. Haas and T. Leisinger, Genetic and Molecular Characterization of the Pseudomonas Plasmid pVS1, Plasmid, Vol. 11, No. 3, 1984, pp. 206-220. doi:10.10160147-619X(84)90027-1 Y. Itoh and D. Haas, Cloning Vectors Derived from the Pseudomonas Plasmid pVS1, Gene, Vol. 36, No. 1-2, 1985, pp. 27-36. doi:10.10160378-1119(85)90066-6 G. Van den Eede, R. Deblaere, K. Goethals, M. Van Montagu and M. Holsters, Broad Host Range and Promoter Selection Vectors for Bacteria That Interact with Plants, Molecular Plant-Microbe Interactions, Vol. 5, No. 3, 1992, pp. 228-234. doi:10.1094MPMI-5-228 S. Heeb, Y. Itoh, T. Nishijyo, U. Schnider, C. Keel, J. Wade, U. Walsh, F. OGara and D. Haas, Small, Stable Shuttle Vectors Based on the Minimal pVS1 Replicon for Use in Gram-Negative, Plant-Associated Bacteria, Molecular Plant-Microbe Interactions, Vol. 13, No. 2, 2000, pp. 232-237. doi:10.1094MPMI.2000.13.2.232 P. Hajdukiewicz, Z. Svab and P. Maliga, The Small, Versatile pPZP Family of Agrobacterium Binary Vectors for Plant Transformation, Plant Molecular Biology, Vol. 25, No. 6, 1994, pp. 989-994. doi:10.1007BF00014672 I. J. W. M. Goderis, M. F. C. De Bolle, I. E. J. A. Francois, P. F. J. Wouters, W. F. Broekaert and B. P. A. Cammue, A Set of Modular Plant Transformation Vectors Allowing Flexible Insertion of up to Six Expression Units, Plant Molecular Biology, Vol. 50, No. 1, 2002, pp. 17-27. doi:10.1023A:1016052416053 T. Tzfira, G. W. Tian, B. Lacroix, S. Vyas, J. Li, Y. Leitner-Dagan, A. Krichevsky, T. Taylor, A. Vainstein and V. Citovsky, pSAT Vectors: A Modular Series of Plasmids for Autofluorescent Protein Tagging and Expression of Multiple Genes in Plants, Plant Molecular Biology, Vol. 57, No. 4, 2005, pp. 503-516. doi:10.1007s11103-005-0340-5 S. Lee, New Binary Ti Vectors with Co-Directional Replicons for Agrobacteium tumefaciens-Mediated Transformation of Higher Plants, Ph. D. Thesis, Louisiana State University, Baton Rouge, 2011. S. Lee, G. Su, E. Lasserre, M. A. Aghazadeh and N. Murai, Smaller High-Yielding Binary Ti Vectors pLSU with Co-Directional Replicons for Agrobacterum tumefaciens-Mediated Transformation of Higher Plants, Plant Science, Vol. 187, 2012, pp. 49-58. G. Su, S. Park, S. Lee and N. Murai, Low Co-Cultivation Temperature at 20730C Resulted in the Reproducible Maximum Increase in Both the Fresh Weight Yield and Stable Expression of GUS Activity after Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation of Tobacco Leaf Disks, American Journal of Plant Sciences, Vol. 3, No. 4, 2012, pp. 537-545. Journal Menu gtgt